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新品推荐:染色体核型吉姆莎(Giemsa)染色分析试剂盒

人阅读 发布时间:2021-09-06 16:32

染色体核型吉姆莎(Giemsa)染色分析试剂盒产品说明书

主要用途

染色体核型吉姆莎(Giemsa)染色分析试剂是一种旨在通过使用吉姆莎染料与染色体DNA的结合并呈现深浅不一的条带,来显示染色体带型特征而构成细胞染色体核型的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种生长中的动物或人体细胞。产品即到即用,性能稳定,显色清晰。
 
技术背景
 
染色体核型(karyotyping)是一种根据体细胞中全套染色体带型形态特征和大小顺序排列,并依次配对、分组,构成该个体的核型或染色体组型的方法,从而可以识别和分析染色体结构和数量的异常,成为产前诊断或肿瘤细胞遗传学的工具。其中使用吉姆莎(Giemsa)染色,即经过胰蛋白酶处理后,进行吉姆莎染料染色,呈现系列深浅不一的300400个条带,称之为G-带。其中浅色条带为异染色质、复制晚期以及AT丰富的区域,而深色条带为常染色质(euchromatic)、复制早期和GC丰富的区域。
 
产品内容

清理液(Reagent A        200毫升
滞态液(Reagent B     1毫升
低渗液(Reagent C   100毫升
固定液AReagent D   375毫升
固定液BReagent E   125毫升
消化Reagent F    50毫升
中和Reagent G    20毫升
预备液Reagent H    50毫升
染色液Reagent I    20毫升
产品说明书                   1

保存方式

保存滞态液(Reagent B消化Reagent F)和中和Reagent G)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;滞态液(Reagent B染色液Reagent I,避免光照,有效保证6

用户自备
完全细胞培养液:用于细胞培养
无离子水:用于清洗染色的载玻片
50毫升锥形离心管:用于细胞处理的容器
恒温水槽:用于预热试剂溶液
台式离心机:用于沉淀细胞
小型染色缸:用于载玻片染色的容器
载玻片:用于细胞涂片和染色
显微镜:用于观察细胞分裂和染色体组型

实验步骤

实验开始前,将试剂盒里的固定液AReagent DBReagent E4℃的冰箱里取出,移取A37.5毫升和B12.5毫升加入到50毫升锥形离心管,混匀后标记成为固定工作液,置入冰槽里。同时在37℃恒温水槽里预热清理液(Reagent A)、滞态液(Reagent B)、低渗液(Reagent C。然后进行下列操作。
 
  • 限定细胞在有丝分裂中期(METAPHASE

1)贴壁细胞处理
      1. 抽去铺满生长细胞的75cm2细胞培养瓶的培养液
      2. 加入10毫升 清理液(Reagent A到细胞培养瓶,覆盖培养瓶表面,
      3. 小心抽去清理液(Reagent A
      4. 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶四乙酸混合液,铺满整个培养平面
      5. 放进37℃培养箱孵育3分种
      6. 手击振动培养瓶,使细胞脱落
      7. 加入15毫升用户自备的完全细胞培养液,充分混匀
      8. 移出10毫升混匀物到新的75cm2细胞培养瓶
      9. 加入10毫升用户自备的完全细胞培养液到上述新的75cm2细胞培养瓶
      10. 放进37℃细胞培养箱孵育1620小时
      11. 小心抽去铺满70%生长细胞的75cm2细胞培养瓶的培养液
      12. 加入10毫升用户自备的完全细胞培养液
      13. 加入100微升37℃预热的滞态液(Reagent B),轻轻摇动细胞培养瓶,使其混匀
      14. 放进37℃细胞培养箱,孵育2小时(注意:可以延长至12小时
      15. 在显微镜观察下,细胞开始收缩变圆,表明细胞处于有丝分裂
      16. 手击振动拍打培养瓶,使细胞脱落
      17. 移出含有滞态液(Reagent B的细胞培养液到50毫升锥形离心管
      18. 加入10毫升清理液(Reagent A到培养瓶,清洗整个细胞表面
      19. 移出清理液合并到50毫升锥形离心管
      20. 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶四乙酸混合液,铺满整个培养平面
      21. 置入37℃培养箱3分种
      22. 手击振动培养瓶,使细胞脱落
      23. 加入10毫升用户自备的完全细胞培养液,充分混匀
      24. 移出混匀物合并到50毫升锥形离心管
      25. 放进台式离心机离心5分钟,速度为300g
      26. 小心抽去上清液(保留0.3毫升)
      27. 手指轻弹混匀细胞


2)悬浮细胞处理
        1. 准备好108悬浮细胞(淋巴细胞、白细胞、骨髓细胞等)
        2. 移入到50毫升锥形离心管
        3. 放进台式离心机离心5分钟, 速度为300g
        4. 小心抽去上清液
        5. (选择步骤)加入10毫升 清理液(Reagent A),混匀颗粒群
        6. (选择步骤)放进台式离心机离心5分钟, 速度为300g
        7. (选择步骤)小心抽去清理液(Reagent A
        8. 加入15毫升用户自备的RPMI 1640完全细胞培养液,充分混匀细胞颗粒群
        9. 转移到到新的75cm2细胞培养瓶
        10. 放进37℃细胞培养箱孵育1620小时
        11. 移入到50毫升锥形离心管
        12. 放进台式离心机离心5分钟, 速度为300g
        13. 小心抽去上清液
        14. 加入10毫升用户自备的RPMI 1640完全细胞培养液,混匀细胞颗粒群
        15. 加入100微升37℃预热的滞态液(Reagent B),混匀
        16. 放进37℃细胞培养箱,孵育2小时(注意:可以延长至12小时
        17. 在显微镜观察下,细胞开始收缩,表明细胞处于有丝分裂
        18. 放进台式离心机离心5分钟, 速度为300g
        19. 小心抽去上清液
        20. 加入10毫升用户自备的RPMI 1640完全细胞培养液,充分混匀
        21. 放进台式离心机离心5分钟,速度为300g
        22. 小心抽去上清液(保留0.3毫升)
        23. 手指轻弹混匀细胞

二.低渗处理有丝分裂细胞
 
    1. 用滴管一滴一滴加入10毫升37℃预热的低渗液(Reagent C50毫升锥形离心管,轻轻摇动
    2. 放进37℃细胞培养箱孵育15分钟
    3. 放进台式离心机离心5分钟,速度为300g
    4. 小心抽去上清液(保留0.3毫升)
    5. 手指轻弹混匀细胞

三.固定细胞

1.用滴管一滴一滴加入10毫升预冷的固定工作液50毫升锥形离心管,轻轻摇动
2.放进冰槽里孵育至少5分钟
3.放进台式离心机离心5分钟,速度为300g
4.小心抽去上清液(保留0.3毫升)
5.手指轻弹混匀细胞
6.重复上述步骤15,直到沉淀细胞颗粒群为白色(越白越好)
7.加入5毫升固定工作液到50毫升锥形离心管,充分混匀

 

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