注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

规格：100T/96S

产品内容：

提取液：液体120ml×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体6ml×1 瓶，4℃保存；试剂二：液体5ml×1 瓶，4℃保存；试剂三：液体6ml×1 瓶，4℃保存；
标准品：粉剂10mg×1 瓶（避光），4℃保存。（称取1mg加入10ml提取液，即为100μg/ml标准品）

试验中所需的仪器和试剂：

研钵、冰、低温离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。

产品说明：

AsA 又称维生素c。AsA 是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA 在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
抗坏血酸具有较强还原能力将Fe3+还原成Fe2+，邻二氮菲与Fe2+会形成红色螯合物，在534nm处具
有强的吸收法，且吸光值与反应液中抗坏血酸含量呈正比。

操作步骤：

一、样品的前处理：

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1ml提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
细菌、真菌：按照细胞数量（10个）：提取液体积（ul）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g，4℃离心 20min，取上清液置冰上混匀待测。
血清等液体：按照样本体积（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1ml 样本，加入1ml提取液）进行混匀。8000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

二、测定操作表：

分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 534nm，提取液调零。
测定前将所有试剂 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min 以上。
标准曲线的绘制及样本测定（按顺序加入下列试剂）

	0μg/ml	15μg/ml	30μg/ml	60μg/ml	80μg/ml	100μg/ml	测定管
标准品（μl）	0	6	12	24	32	40	0
样本（μl）	0	0	0	0	0	0	40
提取液（μl）	40	34	28	16	8	0	0
试剂一（μl）	50	50	50	50	50	50	50
混合、摇匀
试剂二（μl）	25	25	25	25	25	25	25
试剂三（μl）	50	50	50	50	50	50	50
蒸馏水（μl）	50	50	50	50	50	50	50

充分混匀，室温静置 15min 后，534nm 处测定各管吸光值。如底部有沉淀，离心后再读数三、抗坏血酸含量计算
根据标准曲线，将样品△A 带入公式中（x），计算出样品浓度 y（μg/mL）。1.按蛋白浓度计算
抗坏血酸（μg / mg prot）=y×V 样÷（V 样×Cpr） 2.按样本鲜重计算
抗坏血酸（μg /g 鲜重）= y×V 样÷(V 样÷V 样总×W) 3.按细胞数量计算
抗坏血酸（μg /106cell）= y×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量) 4.按体积计算
抗坏血酸（μg /ml）=10y
V 样总：上清液总体积，mL；V 样：加入反应体系中上清液体积；W：样品质量，g ；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；细胞数量：以 106 为单位计量；T：样本稀释倍数。

注意事项：

1、样品处理需匀浆完全，抗坏血酸易分解，需避光保存
2、标准品：现配现用。
3、若不确定样品中抗坏血酸含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。
4、因为提取液中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。

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